紫外分光光度計的原理： 物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據(jù)物質的吸 收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。
紫外分光光度法的定量分析基礎是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質在一定濃度的吸光度與它的吸收介質的厚度呈正比，其數(shù)學表示式如下：
A=錬c
式中：A—吸光度(又稱光密度、消光值)，
å—摩爾吸光系數(shù)(其物理意義為：當吸光物質濃度為1摩爾/升，吸收池厚為1厘米，以一定波長原光通過時，所 引起的吸光值A)，b—吸收介質的厚度(厘米)，c—吸光物質的 濃度(摩爾/升)。
物質的顏色和它的電子結構有密切的關系，當輻射(光子)引起電子躍遷使分子(或離子)從基 態(tài)上升到激發(fā)態(tài)時，分子(或離子)就會在可見區(qū)或紫外呈現(xiàn)吸光，顏色的發(fā)生或變化是和分 子的正常電子結構的變形的。當分子中含有一個或更多的生色基因(即具有不飽和鍵的 原子基團)，輻射就會引起分子中電子能量的改變。常見的生色團有：
CO， -N=N-， -N=O，-C N，CS
如果兩個生色團之間隔一個碳原子，則形成共軛基團，會使吸收帶移向較長的波長處(即紅 移)，且吸收帶的強度顯著增加。當分子中含有助色基團(有未共用電子對的基團)時，也會 產生紅移效應。常見的助色基團有：-OH -NH2， -SH， -Cl, -Br, -I
